¿Cómo se realiza la Calibración de Microplacas?

noviembre 4, 2022by Kalstein
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Los lectores de microplacas son equipos ópticos utilizados para la detección de fenómenos, físicos, químicos o biológicos, mediante la lectura de la absorbancia. También son conocidos como lectores o espectrofotómetros ELISA, ya que se asocian con el test de ELISA o Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzima, una técnica de laboratorio utilizada para la detección de antígenos en muestras. Los lectores de microplacas tienen un funcionamiento similar al de los espectrofotómetros de uv-visible, ya que miden la cantidad de luz que es absorbida por una muestra en diferentes longitudes de onda. Están compuestos por 3 elementos principales, el detector, el monocromador y la fuente de iluminación. 

Estos equipos son especialmente utilizados para llevar a cabo análisis cualitativos o análisis cuantitativos en diferentes industrias, laboratorios biotecnológicos, clínicos, bioquímicos, de investigación o de desarrollo, entre otros. Por esta razón es de suma importancia que estén calibrados, una buena calibración determina el desempeño de dicho equipo y por lo tanto, la calidad de los resultados obtenidos. 

Lectores de microplaca o lectores ELISA

El lector de microplacas o lector ELISA, es un tipo de espectrofotómetro, se diferencia de los convencionales porque este dispone de rejillas o filtros que limitan la longitud de onda a utilizar, es decir, no pueden trabajar en amplios intervalos de longitud de onda, por lo general trabajan en rangos ubicados entre los 400 nm y los 750 nm (región visible), son muy pocos los que trabajan con luz ultravioleta y efectúan análisis entre los 340 nm y los 700 nm. 

El sistema óptico de los lectores de microplaca está diseñado para dirigir la luz hacia los micropozos o pocillos de la microplaca, que es donde se encuentra depositada la muestra que se está analizando. La luz atraviesa la muestra, este haz tiene un diámetro que varía entre 1 mm a 3 mm. El sistema de detección recibe la energía lumínica que atraviesa la muestra, luego la amplifica y mide la absorbancia, finalmente, a través de su sistema de lectura, transforma lo medido en datos que pueden ser analizados por el usuario. Las microplacas en las que se coloca la muestra están hechas de poliestireno, disponen de una cantidad definida de micropozos que, por lo general, es de 96, dispuestos en un configuración de 8 filas por 12 columnas. En la actualidad, existen muchos tipos de lectores de microplacas, desde modelos muy sencillos, hasta otros más sofisticados que poseen programas específicos de lectura. 

Calibración de los lectores de microplacas 

La razón por la cual todo lector de microplacas o lector ELISA debe ser calibrado es por que, a través de este proceso se determina el sesgo instrumental y la incertidumbre de los resultados obtenidos por el equipo. La escala que se calibra en los lectores ELISA, es la fotométrica, esto se hace a través de filtros de densidad neutra, finalmente, la magnitud que se calibra es la absorbancia. Los filtros utilizados son de forma circular y están puestos sobre una placa de metal que posee las mismas dimensiones de la microplaca que trae el lector de ELISA. 

La calibración de los lectores de microplacas es un procedimiento que debe ser llevado a cabo por un técnico de laboratorio o por personal entrenado que conozca el equipo y que pueda seguir las instrucciones que deben venir incluidas en el equipo. Para la realización de la calibración es necesario poseer un juego de filtros grises, los cuales se montan en una placa de metal similar a la microplaca de análisis. Los filtros pueden ser utilizados para realizar las calibraciones en las longitudes de onda que maneja el equipo, es decir, pueden venir en las siguientes longitudes de onda: 405 nm; 450 nm; 490 nm; 550 nm; 620 nm; 630 nm; 690 nm; y 750 nm. 

Lectores de microplacas marca Kalstein

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