El fluorómetro es un dispositivo analítico diseñado para la determinar las especies y la concentración de compuestos fluorescentes, permite la realización de estudios fotofísicos completos. Su fiabilidad, la minuciosidad del control operativo, el cual es sensible, específica para especies biológicas y químicas, la simplicidad de su configuración y sus bajos costos operativos, son características que lo hacen distinguirse de otras técnicas de análisis. Es un equipo que se adapta fácilmente al laboratorio de rutina, al uso como instrumento de campo, y sirve de referencia para el apoyo en la investigación científica. Es una valiosa herramienta analítica tanto para el análisis cuantitativo como cualitativo.
Fluorómetro y sus aplicaciones
El fluorómetro destaca por su amplia gama de sus aplicaciones:
- En la química inorgánica se utiliza en la determinación de rutenio en platino metálico, y de aluminio, boro, cromo y magnesio en aleaciones de acero.
- En la ciencia de los materiales, se emplea en el estudio de los mecanismos de oxidación, degradación y estabilización de polímeros (mediante la incorporación de fluoróforos en los medios poliméricos), entre otros.
- En la gestión ambiental se utiliza para la identificación de fuentes de contaminantes en agua, detección de compuestos derivados de petróleo y de manchas de derrame de hidrocarburos en la superficie en afluentes.
- En biología molecular, debido a su alta sensibilidad, se emplea para cuantificar el ADN, ARN y los productos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). También es utilizada para detectar la contaminación del ADN en los medicamentos, para evaluar concentración de especies en fármacos y en ensayos de vitaminas para procedimientos farmacéuticos.
La fluorometría como técnica de análisis
La fluorometría es una técnica poderosa y ampliamente aceptada en el ámbito científico. Esta ha evolucionado desde principios de la década de 1980, el crecimiento ha sido impulsado por el uso de la fluorescencia como método no invasivo por la biología, la bioquímica y la química. La fluorescencia es un proceso instantáneo que ocurre cuando las moléculas de un material son excitadas por la absorción de radiación electromagnética. Los electrones se relajan hasta su estado fundamental, pierden energía vibracional causando que el espectro de emisión se mueva a longitudes de ondas más largas. El tiempo de vida media de una especie excitada es breve.
Cualquier molécula tiene un espectro de absorción y uno de emisión, en los cuales los átomos excitados liberan su exceso de energía y se relajan a su estado fundamental (emisión de luz fluorescente). El espectro de absorción muestra la eficiencia relativa de diferentes longitudes de onda para producir fluorescencia, en cambio, el espectro de emisión indica la intensidad relativa de la radiación emitida en varias longitudes de onda. El tiempo necesario para que se produzca la fluorescencia es de 10−8 a 10−7 s.
Aspectos a considerar para utilizar un fluorómetro
- Trabajar con una muestra patrón como referencia, o en su defecto un blanco (agua o líquido matriz) que permita poner en cero el equipo.
- Mantener un estándar de concentración conocido del material que se va a evaluar. Para calibrar a punto el equipo es preferible emplear concentraciones del 80 % de la concentración más alta que se leerá.
- Si se van a determinar concentraciones superiores al rango lineal se debe preparar una curva de calibración con varios estándares.
- Es importante que la solución patrón que se evaluará sea estable químicamente.
- Los filtros se pueden usar solos o en combinación para seleccionar la banda espectral deseada.
- Un fluorómetro debe calibrarse cada vez que se cambien las ópticas o los filtros.
- Se debe ser riguroso en los procedimientos de laboratorio, como la limpieza del material de laboratorio y la preparación cuidadosa de las muestras estándares, ya que los disolventes utilizados para el análisis deben estar libres de impurezas absorbentes.
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